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TC、TG實驗方法

發布時間：2014/2/7 16:53:15　瀏覽次數：20383　[字號：大 中 小]　 [關閉此頁　打印此頁]

一、組織樣本

1、同樣還是用等滲緩沖液，按重量體積1：9，制備勻漿，2500rpm*10min，取上清即10%勻漿用于TG、TC的測定（提取的不完全，但也能測定）

2、用有機溶劑提取，a:用無水乙醇作勻漿介質，按上面方法制備勻漿待測，提取效果比等滲緩沖液好

                      b:用特殊有機溶劑提取（如氯仿甲醇混合液等）提取效果好，但由于高揮發，測定不準確，所以一般需用N2吹干后用無水乙醇復溶后進行測定。

 

 

二、培養細胞

   1、用PBS洗細胞

2、加入500ul乙醇，使之鋪滿培養皿，培養皿內的細胞泛白時把培養皿斜放，用細胞刮板將細胞刮下來，使細胞浸泡在乙醇中

   3、用移液器把細胞和乙醇移到玻璃勻漿器中，碾磨3分鐘成懸液

   4、收集懸液，4000 rpm*10min離心，取上清50ul測定

 

 

三、奶樣

新鮮或者凍存的奶樣本，用無水乙醇按照不同比例進行提取（奶樣：無水乙醇=1：1、1：4、1：9、1：19、1：49、1：99）充分漩渦混勻2分鐘，4000轉/分離心10分鐘，取上清按操作表操作。

按稀釋度、結果做濃度曲線，取直線線性段的濃度為宜。

細胞爬片制備詳細過程

5-羥色胺