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細胞做AKP怎么處理？

發(fā)布時間：2014/2/8 9:25:33　瀏覽次數(shù)：4472　[字號：大 中 小]　 [關閉此頁　打印此頁]

購買了貴單位的AKP活性檢測試劑盒，貨號是JC-A0059.

我打算檢測96孔板貼壁細胞中不同藥物處理后AKP活性的變化，看了一下說明書，有些地方不明白：

1.細胞裂解液用的是什么：說明書舉例用的是“0.2毫升的1%Trition加入12孔板",但不知道要處理細胞多長時間呢？96孔板大概需要加多少呢？

2.舉例中提到要用BCA法測定蛋白濃度，我不太清楚，做貼壁細胞AKP活性檢測都需要檢測蛋白濃度嗎？

這里的蛋白濃度是用Triton裂解細胞后獲得的蛋白裂解液檢測的嗎？是否每個孔都需要檢測蛋白？

懇請盡快解答，謝謝！！我的聯(lián)系電話是13798040097  杜宇

回復：

1、用TritonX-100裂解細胞，測定AKP活性，我們建議4℃裂解，但是一般所需時間會比較長，至少需要2小時左右，但很多老師提到時間不夠，需要4℃裂解過夜！（關于細胞破碎的程度，最好用顯微鏡觀察確定）

96孔板容量較少，裂解液只需要覆蓋滿細胞就可以了，所以96孔板加30-50微升就可以了！

2、測定細胞的AKP活性，需要破碎細胞，考慮到每一孔的細胞量的差異，所以破碎細胞后我們都會同時檢測其中的總蛋白濃度！用于結(jié)果計算并校正細胞數(shù)量的差異！也就是用TritonX-100裂解細胞后一部分用于AKP的測定；一部分用于總蛋白的定量！

當然也有老師不考慮細胞量的問題，直接按孔來表示并比較結(jié)果，不測定蛋白！

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