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CAT、MDA、PX測定的一些問題？

發布時間：2014/2/8 9:26:11　瀏覽次數：11535　[字號：大 中 小]　 [關閉此頁　打印此頁]

今天做預試的過程中遇到一些問題，想請教：

1，CAT試劑盒  樣品為大鼠腦組織10%勻漿液，我先后測定了0.5%、1%、2%、10%的勻漿液濃度，由于我們沒有0.5cm光徑的測定杯，所以都用的1cm光徑的，測定管和對照管的OD值始終都在1.1-1.2，隨濃度差變化不大，反應液顏色呈淡黃色。

我想請問，如果使用1cm光徑測定，需要做何調整不？還是一定要用0.5cm光徑的。另外，我的樣品里是否自身含有較高的過氧化氫，所以導致測定和對照管差值微弱？（如0.5%勻漿液 對照1.136  測定1.135；1%勻漿液 對照1.152 測定1.147）

2，MDA微量試劑盒  由于我們之前用過普通的MDA試劑盒，測定值不理想，所以這次訂購的微量法。10%腦勻漿液200ul加入反應，全按照說明書操作，讀值測定管0.923 對照管0.265，這樣的值是否超過該方法的線性范圍？

3，血清鐵試劑盒  遇到的問題與CAT類似，我還是以 1cm光徑測定，而非說明書的0.5cm光徑，讀值 空白管-0.009 ，標準 0.081，測定 0.163，請問是否在線性范圍內？可否這樣操作。

4，GSH-Px試劑盒中 GSH僅2只粉劑（50T），并要求現用現配，具體實驗操作中無法1次或2次就用完該kit，那該試劑如果配成溶液后4度保存，對測定結果有何影響？或者可以-20度凍存保存溶液？

回復：

CAT在腦組織中表達很低，不需要做濃度摸索，直接用10%勻漿操作，樣本量夠的話可以取0.1ml進行測定；1cm光徑測定的話，吸光度肯定在1.0以上，但由于計算所用的是一個系數（271），所以需要將1cm測得的吸光度代入公式計算所得結果再除以2！

MDA測定腦組織用普通的MDA很多，并不影響測定結果。并且MDA測定的是具體含量，單從老師的測定吸光度來看有點高，可以取100微升操作！

血清鐵用1cm光徑不影響，只要我們的反應體系加入到您的1cm光徑的比色皿中，您可以正常比色即可！您的吸光度沒有問題！但是空白吸光度不應該是負值，用蒸餾水調零，出現負值應該是2個比色皿之間差異導致！

GSH-PX（50T），GSH粉劑只有2支，老師操作的間隔時間有多長？如果是分批采樣的話，一般我們都建議收集樣本后一起進行測定；配制好的1mmol/L的GSH，4℃冷藏一周沒有問題！

測定GST樣本怎么處理？

大鼠或者小鼠的大腦皮質T-SOD,CAT,GSH參考值？