

ATP含量測定的一些問題?
發布時間:2014/2/8 10:06:21 瀏覽次數:4587 [字號:大 中 小] [關閉此頁 打印此頁]
每次測量都是用新的EP管,漩渦混勻器充分混勻。用分光光度計測量。比色皿都是經過4遍純水沖洗。有5個問題還請幫我回答一下:
1.由于我們沒有0.5cm光徑的比色皿,所以在加入終止劑后又用蒸餾水對原液進行了4稀釋(吸光度就在1以下了)。這樣可以嗎?
2.你們有沒有出現過測定管值小于對照管的現象。
3.體系中加入終止劑后,經過稀釋為什么有的體系中會出現懸浮物?這是怎么回事?
4.顯色應用液的配制:顯色劑甲液是7ml/瓶,顯色劑乙液是6ml/瓶。用時將兩液混勻即可。如果這樣做的話那么總液量是不是就有13ml了?我一次實驗用不了這么多的顯色液,比如只用6.5ml。是不是就取甲液3.5ml、乙液3ml呢?
5.這是試劑盒是不是你們最新推出的產品。穩定嗎?
回復:
1、最終顯色液我們一般不考慮稀釋,雖然理論上都是水相,但是本身ATP含量就比較低,再稀釋更容易出現測定不出的情況。
2、查批量檢測記錄有個別樣本中ATP表達很低的情況下,會出現測定管等于或略小于對照管的現象。
3、反應體系,加終止劑后,沉淀蛋白終止反應,所以體系會出現絮狀物,混勻成渾濁,離心后有沉淀,上清澄清透亮。
4、顯色劑甲乙液,可以根據需要量吸出后配制,當然如果一次性配完后,5天內使用沒有問題。
5、ATP含量試劑盒推出不久,由于樣本中表達不高,顯色劑靈敏度很高,出現誤差也是可能的
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